本发明公开了一种复方桑黄口服液及其制备方法，是应用生物工程发酵技术，以桑黄菌为出发菌株，经液体发酵、微波提取获得富含桑黄多糖的粗多糖浓缩液，再加上绞股蓝粗多糖浓缩液、芦荟粗多糖浓缩液、党参粗多糖浓缩液、枸杞粗多糖浓缩液（多糖浓度均达10mg/ml），经调配、装瓶、锁盖、杀菌后制得复方桑黄口服液。经动物实验研究表明，本发明的复方桑黄口服液具有增强单核-巨噬细胞功能、增强自然杀伤细胞活力，提示本复方桑黄口服液具有增强免疫功能的作用，可显著提高机体特异性和非特异性免疫功能。
1.xa0一种复方桑黄口服液，其特征在于：所述复方桑黄口服液中的组分及各组分重量百分数为：桑黄粗多糖浓缩液60%，绞股蓝粗多糖浓缩液10%，芦荟粗多糖浓缩液10%，党参粗多糖浓缩液10%，枸杞粗多糖浓缩液10%；其是以桑黄菌为出发菌株，经液体发酵、微波提取获得富含桑黄多糖的粗多糖浓缩液，再加上绞股蓝粗多糖浓缩液、芦荟粗多糖浓缩液、党参粗多糖浓缩液、枸杞粗多糖浓缩液调制而成。
2.xa0根据权利要求1所述复方桑黄口服液，其特征在于：将经液体发酵得到的发酵醪经板框压滤后，得到发酵液和富含菌丝的滤渣A；将滤渣A加入其重量1-5倍的水，微波功率480W处理10min，再经板框压滤得第一次提取液和滤渣B；将滤渣B再重复提取、过滤，得第二次提取液；将发酵液和两次提取液合并，50-70℃，0.05-0.095MPa下低温真空浓缩至可溶性固形物含量为15%-20%，加入乙醇，使醇析时的乙醇浓度为70%-75%，冷却静置10-20h后离心得沉淀物，再加水溶解得桑黄粗多糖浓缩液，其多糖含量为10mg/mL。
3.xa0根据权利要求1所述复方桑黄口服液，其特征在于：所述绞股蓝粗多糖浓缩液的制备方法为：取绞股蓝洗净、粉碎，加入绞股蓝重量10-30倍水，微波功率250W处理1-2xa0min，经板框压滤得第一次提取液和滤渣；将滤渣再重复提取、过滤，得第二次提取液；合并两次提取液，50-70℃，0.05-0.095MPa下低温真空浓缩至可溶性固形物含量为15%-20%，加入乙醇，使醇析时的乙醇浓度为70%-75%，冷却静置10-20h后离心得沉淀物，再加水溶解得绞股蓝粗多糖浓缩液，其多糖含量为10mg/mL。
4.xa0根据权利要求1所述复方桑黄口服液，其特征在于：所述芦荟粗多糖浓缩液的制备方法为：将新鲜芦荟叶洗净、去皮取凝胶体，按凝胶体重量10-20倍加入水，微波功率250W处理1-2xa0min，经板框压滤得第一次提取液和滤渣；将滤渣再重复提取、过滤，得第二次提取液；合并两次提取液，50-70℃，0.05-0.095MPa下低温真空浓缩至可溶性固形物含量为15%-20%，加入乙醇，使醇析时的乙醇浓度为70%-75%，冷却静置10-20h后离心得沉淀物，再加水溶解得芦荟粗多糖浓缩液，其多糖含量为10mg/mL。
5.xa0根据权利要求1所述复方桑黄口服液，其特征在于：所述党参粗多糖浓缩液的制备方法为：取党参洗净、切碎，按党参重量10-30倍加入水，微波功率480W处理5-10xa0min，经板框压滤得第一次提取液和滤渣；将滤渣再重复提取、过滤，得第二次提取液；合并两次提取液，50-70℃，0.05-0.095MPa下低温真空浓缩至可溶性固形物含量为15%-20%，加入乙醇，使醇析时的乙醇浓度为70%-75%，冷却静置10-20h后离心得沉淀物，再加水溶解得党参粗多糖浓缩液，其多糖含量为10mg/mL。
6.xa0根据权利要求1所述复方桑黄口服液，其特征在于：所述枸杞粗多糖浓缩液的制备方法为：取枸杞洗净，按枸杞重量5-15倍加入水，微波功率480W处理5-10xa0min，经板框压滤得第一次提取液和滤渣；将滤渣再重复提取、过滤，得第二次提取液；合并两次提取液，50-70℃，0.05-0.095MPa下低温真空浓缩至可溶性固形物含量为15%-20%，加入乙醇，使醇析时的乙醇浓度为70%-75%，冷却静置10-20h后离心得沉淀物，再加水溶解得枸杞粗多糖浓缩液，其多糖含量为10mg/mL。
7.xa0根据权利要求1所述复方桑黄口服液，其特征在于：将所得桑黄粗多糖浓缩液、绞股蓝粗多糖浓缩液、芦荟粗多糖浓缩液、党参粗多糖浓缩液和枸杞粗多糖浓缩液按比例混合均匀后，经装瓶、锁盖、杀菌后即为成品。技术领域
本发明属于保健品领域，具体涉及一种复方桑黄口服液及其制备方法。
背景技术
桑黄（Phellinusxa0igniarius(L.exxa0Fr.)Quel），属担子菌纲、多孔菌目、多孔菌科、针层孔菌属(Phellinus)，俗称火木层孔菌、针层孔菌、桑耳、桑臣、胡孙眼等。桑黄是一种珍贵的药用真菌，在我国传统中医药领域中主要用以治疗淋病、崩漏、带下、疵瘕积聚、癖软、脾虚泄泻等，在日本则作为利尿剂使用。近年来，国内外学者对桑黄的药理作用作了较为深入的研究，证实桑黄子实体及其提取物除了具有传统认知的药理作用以外，还具有抗癌、抗肿瘤、抗诱变、免疫调节、保肝和抗肝硬化等作用。桑黄加工品在国际医药市场上价格昂贵，但由于野生桑黄越来越稀少，且外销需求量大，往往出现供不应求的局面。在我国，桑黄的人工栽培研究才刚刚起步，无法满足市场的需求，且主要针对桑黄子实体及其提取物，较少以桑黄液体发酵提取物进行研究。现代研究表明，桑黄中具有抗癌作用的物质是桑黄多糖，它能通过细胞调节和体液免疫来提高免疫力而抑制肿瘤细胞的生长和转移，并且无毒副作用。因此，研究桑黄液体发酵提取物——桑黄多糖，对于保护天然资源、解决资源缺乏，具有十分重要的意义。刘斌等的发明专利（CNxa0103405639A）介绍了一种桑黄多糖与中药复方降血糖口服液及其制备方法，它以桑黄液体菌为出发菌，进行巨菌草固体发酵，获得大量的桑黄菌丝；采用热水浸提法提取桑黄多糖，去杂﹑醇沉﹑浓缩后冷冻干燥成多糖粉末；最后将多糖粉末与中药复方浓缩液（玉竹、黄芪、桑叶、三七、枸杞子）混合配制成不同剂量的复合物。桑黄多糖与中药复方降血糖复合物经药效学实验，表明高剂量组的血糖下降率高达44.62%，具有很强的降血糖效果。但目前尚未见以桑黄多糖作为主要成分，结合其它增强免疫的药食两用材料的提取物多糖，经复方调配制成具有增强免疫功能的口服液的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种复方桑黄口服液，制备工艺稳定可靠，可操作性强，生产周期短，降低生产能耗；通过与其他药食两用原料的协同作用，可达到较好的保健效果。经动物试验表明，本复方桑黄口服液具有增强单核-巨噬细胞功能、增强自然杀伤细胞活力，提示本复方桑黄口服液具有增强免疫功能的作用，可显著提高机体特异性和非特异性免疫功能。为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种复方桑黄口服液中的组分及各组分重量百分数为：桑黄粗多糖浓缩液60%，绞股蓝粗多糖浓缩液10%，芦荟粗多糖浓缩液10%，党参粗多糖浓缩液10%，枸杞粗多糖浓缩液10%。所述复方桑黄口服液的制备方法，是以桑黄菌为出发菌株，经液体发酵、微波提取获得富含桑黄多糖的粗多糖浓缩液，再加上绞股蓝粗多糖浓缩液、芦荟粗多糖浓缩液、党参粗多糖浓缩液、枸杞粗多糖浓缩液调制而成。所述复方桑黄口服液的具体制备方法包括以下步骤：1）桑黄菌的液体发酵：按专利文件CNxa0100438882C中的桑黄菌液体发酵方法进行发酵，得发酵醪；2）桑黄粗多糖浓缩液的制备:将发酵醪经板框压滤后，得到发酵液和富含菌丝的滤渣A；将滤渣A加入其重量1-5倍的水，微波功率480W处理10min，再经板框压滤得第一次提取液和滤渣B；将滤渣B再重复提取、过滤，得第二次提取液；将发酵液和两次提取液合并，50-70℃，0.05-0.095MPa下低温真空浓缩至可溶性固形物含量为15%-20%，加入乙醇，使醇析时的乙醇浓度为70%-75%，冷却静置10-20h后离心得沉淀物，再加水溶解得桑黄粗多糖浓缩液，其多糖含量为10mg/mL。3）绞股蓝粗多糖浓缩液的制备：取绞股蓝洗净、粉碎，加入绞股蓝重量10-30倍水，微波功率250W处理1-2xa0min，经板框压滤得第一次提取液和滤渣；将滤渣再重复提取、过滤，得第二次提取液；合并两次提取液，50-70℃，0.05-0.095MPa下低温真空浓缩至可溶性固形物含量为15%-20%，加入乙醇，使醇析时的乙醇浓度为70%-75%，冷却静置10-20h后离心得沉淀物，再加水溶解得绞股蓝粗多糖浓缩液，其多糖含量为10mg/mL；4）芦荟粗多糖浓缩液的制备：将新鲜芦荟叶洗净、去皮取凝胶体，按凝胶体重量10-20倍加入水，微波功率250W处理1-2xa0min，经板框压滤得第一次提取液和滤渣；将滤渣再重复提取、过滤，得第二次提取液；合并两次提取液，50-70℃，0.05-0.095MPa下低温真空浓缩至可溶性固形物含量为15%-20%，加入乙醇，使醇析时的乙醇浓度为70%-75%，冷却静置10-20h后离心得沉淀物，再加水溶解得芦荟粗多糖浓缩液，其多糖含量为10mg/mL；5）党参粗多糖浓缩液的制备：取党参洗净、切碎，按党参重量10-30倍加入水，微波功率480W处理5-10xa0min，经板框压滤得第一次提取液和滤渣；将滤渣再重复提取、过滤，得第二次提取液；合并两次提取液，50-70℃，0.05-0.095MPa下低温真空浓缩至可溶性固形物含量为15%-20%，加入乙醇，使醇析时的乙醇浓度为70%-75%，冷却静置10-20h后离心得沉淀物，再加水溶解得党参粗多糖浓缩液，其多糖含量为10mg/mL；6）枸杞粗多糖浓缩液的制备：取枸杞洗净，按枸杞重量5-15倍加入水，微波功率480W处理5-10xa0min，经板框压滤得第一次提取液和滤渣；将滤渣再重复提取、过滤，得第二次提取液；合并两次提取液，50-70℃，0.05-0.095MPa下低温真空浓缩至可溶性固形物含量为15%-20%，加入乙醇，使醇析时的乙醇浓度为70%-75%，冷却静置10-20h后离心得沉淀物，再加水溶解得枸杞粗多糖浓缩液，其多糖含量为10mg/mL；7）口服液的调制：将所得桑黄粗多糖浓缩液、绞股蓝粗多糖浓缩液、芦荟粗多糖浓缩液、党参粗多糖浓缩液和枸杞粗多糖浓缩液按所述比例混合均匀后，经装瓶、锁盖、杀菌后即为成品。 本发明的显著优点在于：本发明复方桑黄口服液的制备工艺稳定可靠，而且采用微波结合热水浸提法进行提取，可操作性强，生产周期短，降低了生产能耗；通过与其他药食两用原料的协同作用，生产成本更低的同时可达到较好的保健效果。经动物试验表明，本发明复方桑黄口服液的高剂量组（40ml/kg）能明显增强小鼠碳廓清能力，中（20ml/kg）、高剂量组能明显提高小鼠巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数，低（10ml/kg）、中、高剂量组能明显增强小鼠NK细胞活力，表明本复方桑黄口服液具有增强单核-巨噬细胞功能、增强NK细胞活力，提示本复方桑黄口服液具有增强免疫功能的作用，可显著提高机体特异性和非特异性免疫功能。
具体实施方式
一种复方桑黄口服液，是以桑黄菌为出发菌株，经液体发酵、微波提取获得富含桑黄多糖的提取液，再经醇析后制成桑黄粗多糖浓缩液，再加上绞股蓝粗多糖浓缩液、芦荟粗多糖浓缩液、党参粗多糖浓缩液、枸杞粗多糖浓缩液，经调配、装瓶、锁盖、杀菌后制得所述复方桑黄口服液。其制备包括以下步骤：1）桑黄菌的液体发酵：桑黄菌种由福建农林大学生命科学学院微生物保藏室提供，编号为Ph.lxa00001；将桑黄保存种用马铃薯培养基（PDA培养基）进行活化、复壮，置28℃恒温箱静止培养15天，得到生产斜面种，置冰箱中冷藏备用；所述的PDA培养基的配方为（g/L）：去皮马铃薯200，葡萄糖20，琼脂20，加水定容至所需体积，pH自然；将生产斜面种用摇瓶培养基进行扩大培养，得到生产摇瓶一级种；所述的摇瓶培养基的配方为（g/L）：玉米粉50、麸皮粉30、KH₂PO_4xa03、MgSO₄·7H₂Oxa01.5、VB_1xa00.1，加水定容至所需体积，pH自然；培养条件为：以160mL/500mL装量，接入1cm²的斜面菌种，旋转式摇床140rpm培养8d，温度28℃；将生产摇瓶一级种按15%的接种量，按上述摇瓶培养基的配方和培养条件再次用摇瓶培养基进行扩大培养5天，得到生产摇瓶二级种；将生产摇瓶二级种转接入装有发酵培养基的200L种子罐进行扩大培养得到发酵一级种；所述的发酵培养基的配方为（kg/100L）：黄豆粉4、玉米粉3、麸皮粉0.5、酵母粉0.4、CaSO₄xa01、K₂SO_4xa00.1、Na₂HPO₄xa00.15、ZnSO₄·7H₂Oxa00.01、FeSO₄·7H₂Oxa00.05、VB_1xa00.01，加水定容至100L，pHxa07；培养条件为：接种量4L，罐温28℃，罐压0.05MPa，搅拌转速100xa0rpm，通气量1:0.5xa0v/v.min，发酵培养4xa0d；按上述发酵培养基的配方和培养条件将发酵一级种转接入装有2500L发酵培养基的5000L发酵罐培养，发酵6xa0d放罐，得发酵醪；2）桑黄粗多糖浓缩液的制备:将发酵醪经板框压滤后，得到发酵液和富含菌丝的滤渣A；将滤渣A加入其重量3倍的水，微波功率480W处理10min，再经板框压滤得第一次提取液和滤渣B；将滤渣B再重复提取、过滤，得第二次提取液；将发酵液和两次提取液合并，60℃，0.08MPa下低温真空浓缩至可溶性固形物含量为16%，加入乙醇，使醇析时的乙醇浓度为75%，冷却静置15h后离心得沉淀物，再加水溶解得桑黄粗多糖浓缩液，其多糖含量为10mg/mL。3）绞股蓝粗多糖浓缩液的制备：取绞股蓝洗净、粉碎，加入绞股蓝重量20倍水，微波功率250W处理2xa0min，经板框压滤得第一次提取液和滤渣；将滤渣再重复提取、过滤，得第二次提取液；合并两次提取液，60℃，0.08MPa下低温真空浓缩至可溶性固形物含量为15%，加入乙醇，使醇析时的乙醇浓度为75%，冷却静置15h后离心得沉淀物，再加水溶解得绞股蓝粗多糖浓缩液，其多糖含量为10mg/mL；4）芦荟粗多糖浓缩液的制备：将新鲜芦荟叶洗净、去皮取凝胶体，按凝胶体重量10倍加入水，微波功率250W处理1xa0min，经板框压滤得第一次提取液和滤渣；将滤渣再重复提取、过滤，得第二次提取液；合并两次提取液，60℃，0.08MPa下低温真空浓缩至可溶性固形物含量为15%，加入乙醇，使醇析时的乙醇浓度为75%，冷却静置15h后离心得沉淀物，再加水溶解得芦荟粗多糖浓缩液，其多糖含量为10mg/mL；5）党参粗多糖浓缩液的制备：取党参洗净、切碎，按党参重量30倍加入水，微波功率480W处理8xa0min，经板框压滤得第一次提取液和滤渣；将滤渣再重复提取、过滤，得第二次提取液；合并两次提取液，65℃，0.09MPa下低温真空浓缩至可溶性固形物含量为20%，加入乙醇，使醇析时的乙醇浓度为75%，冷却静置15h后离心得沉淀物，再加水溶解得党参粗多糖浓缩液，其多糖含量为10mg/mL；6）枸杞粗多糖浓缩液的制备：取枸杞洗净，按枸杞重量10倍加入水，微波功率480W处理10xa0min，经板框压滤得第一次提取液和滤渣；将滤渣再重复提取、过滤，得第二次提取液；合并两次提取液，70℃，0.09MPa下低温真空浓缩至可溶性固形物含量为18%，加入乙醇，使醇析时的乙醇浓度为75%，冷却静置15h后离心得沉淀物，再加水溶解得枸杞粗多糖浓缩液，其多糖含量为10mg/mL；7）口服液的调制：将桑黄粗多糖浓缩液60xa0wt%，绞股蓝粗多糖浓缩液10xa0wt%，芦荟粗多糖浓缩液10xa0wt%，党参粗多糖浓缩液10xa0wt%和枸杞粗多糖浓缩液10xa0wt%混合均匀后，经装瓶、锁盖、杀菌后即为复方桑黄保健口服液。将本实施例的复方桑黄保健口服液，按卫生部《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）所述方法进行增强免疫的药效学试验，其结果如下： 1.xa0样品对小鼠体重的影响 分别将不同剂量的复方桑黄口服液与专利文件CNxa0100438882C中的桑黄保健口服液作为样品，以生理盐水作为阴性对照，对灌胃小鼠2周，研究其对小鼠体重的影响，结果如表1、表2所示。 表1xa0样品（免疫1组）对小鼠体重的影响（g， ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="11"/> ±S） ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="605"/> 表2xa0样品（免疫2组）对小鼠体重的影响（g， ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="14"/> ±S） ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="604"/> 经表1和表2的对比可见，各组小鼠的体重增长值与阴性对照组比较差异均无显著性（P>0.05），表明本发明复方桑黄口服液对小鼠的体重增长无影响。 2.xa0小鼠碳廓清试验 吞噬试验一般常用作药物影响特异性和非特异性免疫功能的一个重要指标，测定方法大体可分为体内法与体外法（包括半体内法）两类，本试验采用体内法对小鼠碳粒廓清率进行实验，测定并计算出各组的吞噬指数a值，测定结果见表3所示。 表3xa0小鼠碳廓清试验（ ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="11"/> ±S） ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="605"/> 注：与阴性对照组相比*xa0P<0.05，**xa0P<0.01。吞噬指数越大，说明其对颗粒状异物的吞噬活性越高。从表3结果可见，高剂量组、阳性对照组与阴性对照组相比，能明显增加吞噬指数a值，并有显著性差异（P<0.05），即本发明复方桑黄口服液可显著提高小鼠的碳粒廓清能力。 3.xa0小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验 本试验采用半体内法研究样品对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能的影响，结果如表4所示。 表4xa0小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验（ ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="10"/> ±S） ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="604"/> 注：与阴性对照组相比*xa0P<0.05，**xa0P<0.01。吞噬百分率越大，说明腹腔巨噬细胞的吞噬功能越强。从表4可见，中、高剂量组，阳性对照组的吞噬率与阴性对照组相比，能明显增强小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数，并有显著性差异（P<0.05），说明本发明复方桑黄口服液具有增强巨噬细胞吞噬能力的作用。4.xa0NK细胞活性测定NK细胞（自然杀伤细胞）是一群异质性多功能的免疫细胞，是与特异性免疫应答无关的自然毒杀伤细胞，它对体内多种细胞，特别是T、B淋巴细胞有调节作用，对免疫调节、抗肿瘤方面有重要的意义。本试验研究了样品对NK细胞活性的影响，结果见表5所示。 表5xa0NK细胞活性测定（ ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="10"/> ±S） ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="604"/> 注：与阴性对照组相比*xa0P<0.05，**xa0P<0.01。从表5可见，低、中、高剂量组、阳性对照组与阴性对照组相比，能明显增加NK细胞活性，差异显著（P>0.05）或非常显著（P>0.01），说明本发明复方桑黄口服液能显著提高NK细胞的活性。以上实验表明，本发明复方桑黄口服液具有增强单核-巨噬细胞功能、增强NK细胞活力的功能，提示本复方桑黄口服液具有增强免疫功能的作用，可显著提高机体特异性和非特异性免疫功能。